環(huán)狀RNA Hsa-circ-0000520通過miR-1296增加CDK2表達，促進宮頸癌細胞增殖
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文章背景簡介
BACKGROUND INTRODUCTION
宮頸癌是全球第四大女性常見癌癥，造成了巨大的疾病負擔，特別是對低收入或中等收入家庭。此外，子宮頸癌是女性中第二大致命性癌癥，預后差，生存率低。因此，人們對宮頸癌的發(fā)病機制進行了廣泛的探索。
環(huán)狀RNA(circRNA)是一種閉環(huán)結構的非編碼RNA分子，已被證明參與宮頸癌的發(fā)展，其功能是調控基因表達。在之前的研究中，環(huán)狀RNA被報道為宮頸癌的生物標志物。例如circ-0031288與宮頸癌細胞的遷移、侵襲和增殖有關；Circ同源結構域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)被發(fā)現(xiàn)可促進宮頸癌上皮間質轉化，加速宮頸癌的進展。有報道稱Circ-0000520在胃癌和肝細胞癌中異常表達，hsa-circ-0000520如何在宮頸癌中發(fā)揮作用仍有待研究。
有研究表明miR-1296參與了宮頸癌細胞的凋亡，然而miR-1296參與的詳細調控機制在很大程度上仍然有待闡明。環(huán)狀RNA被證明與microRNAs (miRNAs)結合，并影響不同癌癥的發(fā)展，例如，hsa-circ-0005576被發(fā)現(xiàn)可調節(jié)宮頸癌細胞中miR-153的表達。Hsa-circ-0000520與miR-1296之間的相互調節(jié)機制尚未有研究報道。
蘇州科技城醫(yī)院病理科的Qingling Zheng等于2021年在《Journal of Translational Medicine》（IF=6.1，Q2，Top）發(fā)表了《Hsa-circ-0000520 overexpression increases CDK2 expression via miR-1296 to facilitate cervical cancer cell proliferation》。論文旨在研究hsa-circ-0000520在宮頸癌中的作用及其潛在的調控機制，確定宮頸癌的潛在治療靶點。
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所用到的主要方法
METHODS
1、生物信息學分析
2、臨床樣品及細胞培養(yǎng)
3、RT - qPCR和Western blot分析
4、雙熒光素酶報告基因測定
5、免疫組織化學(IHC)
6、RNase R線性RNA消化實驗
7、RNA熒光原位雜交(FISH)
8、細胞轉染
9、克隆形成實驗
10、細胞計數試劑盒(CCK - 8)測定
11、5 - 乙炔 - 2′ - 脫氧尿苷(EdU)測定法
12、RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)測定
13、流式細胞術
14、裸鼠移植瘤的形成
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文章摘要
ABSTRACT
論文首先通過生物信息學方法預測了hsa-circ-0000520在宮頸癌中的作用，結果顯示hsa-circ-0000520在宮頸癌中高表達�；谏镄畔W的結果作者對52對臨床標本中采集的宮頸癌組織及癌旁正常組織進行RT-qPCR，確定了hsa-circ-0000520在宮頸癌組織和細胞中的高表達。RNase R消化實驗證實hsa-circ-0000520具有環(huán)狀RNA的特性，核質分離和FISH實驗顯示hsa-circ-0000520主要定位于細胞質。
細胞實驗顯示：沉默hsa-circ-0000520可抑制癌細胞增殖和誘導細胞凋亡，宮頸癌細胞的增殖能力顯著下降，細胞周期阻滯在G0/G1期，S期細胞減少。研究發(fā)現(xiàn)hsa-circ-0000520缺失誘導P21和P27表達增加，細胞周期相關蛋白CyclinD1表達降低，凋亡相關蛋白Bax表達增加，Bcl-2表達減少。因此，沉默hsa- circ-0000520能夠阻斷宮頸癌細胞周期的進展。
生物信息學分析和雙熒光素酶報告基因檢測都揭示了hsa-circ-0000520與miR-1296之間的靶向關系，兩者存在結合位點，過表達hsa-circ-0000520可以抑制miR-1296的表達。沉默hsa-circ-0000520或過表達miR-1296會抑制CDK2的表達，而抑制miR-1296則會增加CDK2的表達。
TCGA數據庫數據分析和RT-qPCR實驗結果顯示CDK2在宮頸癌中高表達，雙熒光素酶報告基因實驗證實miR-1296與CDK2存在結合位點。隨后，研究證明hsa-circ-0000520介導的miR-1296抑制能夠促進CDK2在宮頸癌中的表達。
論文進一步通過體內實驗驗證hsa-circ-0000520/miR-1296/CDK2在宮頸癌中的作用。裸鼠移植瘤實驗結果表明，沉默hsa-circ-0000520或CDK2可減輕移植瘤的重量和體積，抑制移植瘤的生長，而過表達CDK2則會促進腫瘤生長。
因此，論文實驗結果揭示了hsa-circ-0000520通過抑制miR-1296表達，進而上調CDK2，促進宮頸癌細胞增殖和腫瘤形成的分子機制，提示hsa-circ-0000520作為宮頸癌預后判斷的生物標志物和潛在治療靶點的重要性。
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文章主要內容
CONTENT
（1）對臨床標本中采集的52對宮頸癌組織及癌旁正常組織進行RT-qPCR，結果顯示Hsa-circ-0000520在宮頸癌細胞中高表達。
（2）hsa-circ-0000520調節(jié)了細胞周期的分布并且能夠促進宮頸癌細胞增殖。
（3）hsa-circ-0000520可以與miR-1296結合，miR-1296在宮頸癌組織中的表達降低，Hsa-circ-0000520能夠抑制miR - 1296的表達，并且兩者可以結合共同發(fā)揮作用。
（4）Hsa-circ-0000520能夠通過與miR - 1296結合調控CDK2的表達。
（5）沉默hsa-circ-0000520可通過miR - 1296抑制宮頸癌細胞增殖。
（6）Hsa-circ-0000520敲低通過miR - 1296下調CDK2抑制宮頸癌細胞增殖。
（7）通過裸鼠腫瘤發(fā)生研究驗證Hsa-circ-0000520 在體內通過miR - 1296/CDK2軸促進人宮頸癌細胞的腫瘤發(fā)生。
原文標題 : 環(huán)狀RNA Hsa-circ-0000520通過miR-1296增加CDK2表達，促進宮頸癌細胞增殖
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